細(xì)胞名稱(chēng)：4T1小鼠乳腺癌細(xì)胞

細(xì)胞別稱(chēng)：4T1；4T1-A

組織來(lái)源：乳房

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)基：90%DMEM+10%FBS+PS

生長(zhǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

傳代方法：1:2至1:3，每周2-3次

背景簡(jiǎn)介：4T1細(xì)胞是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥(niǎo)嘌噙抗性細(xì)胞株。當(dāng)4T1細(xì)胞注射到BALB/c小鼠中時(shí)，4T1細(xì)胞會(huì)自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤，可轉(zhuǎn)移到肺、肝、淋巴結(jié)和大腦，同時(shí)在注射部位形成始發(fā)灶，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移時(shí)不需要摘除始發(fā)灶。4T1細(xì)胞在BALB/c小鼠中的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移特性與人體中的乳腺癌十分相近，這種腫瘤是人Ⅵ期乳腺癌的動(dòng)物模型。4T1細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤在手術(shù)后及未手術(shù)情況下轉(zhuǎn)移的動(dòng)力學(xué)相近，可以用作手術(shù)后及未手術(shù)模型。4T1細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤模型跟其他腫瘤模型相比，由于4T1細(xì)胞的抗6-硫鳥(niǎo)嘌噙特性，微小的轉(zhuǎn)移細(xì)胞團(tuán)(少到僅僅1個(gè))也可以在許多遠(yuǎn)端器官中檢測(cè)到，沒(méi)必要數(shù)淋巴結(jié)或稱(chēng)重器官。

細(xì)/胞/形/態(tài)

培/養(yǎng)/指/南

4T1細(xì)胞復(fù)蘇步驟

1.將含有1 mL4T1細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻；

2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后輕輕吹勻；

3.將所有4T1細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）；

4.第三天換液并檢查4T1細(xì)胞密度。

4T1細(xì)胞傳代步驟

如果4T1細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗4T1細(xì)胞1-2次。

2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min（視細(xì)胞消化情況而定），然后在顯微鏡下觀(guān)察4T1細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

3.將4T1細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4T1細(xì)胞凍存步驟

待4T1細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例

1.收集4T1細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，然后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2.根據(jù)4T1細(xì)胞數(shù)量對(duì)應(yīng)加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

培/養(yǎng)/事/項(xiàng)

1.4T1細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，細(xì)胞匯合度越高越難消化，建議分次消化。一次消化至有細(xì)胞移動(dòng)漂浮時(shí)終止，再進(jìn)行二次消化剩余的細(xì)胞，盡量消化成單顆細(xì)胞，4T1細(xì)胞傳代第二天有少量細(xì)胞團(tuán)貼壁未展開(kāi)為正?，F(xiàn)象，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞會(huì)展開(kāi)；

2.若在培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞變圓現(xiàn)象，有可能是細(xì)胞密度過(guò)大，無(wú)法展開(kāi)的原因，可通過(guò)降低傳代密度來(lái)改善。

常/見(jiàn)/問(wèn)/題

問(wèn)：4T1細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM是高糖嗎

是的，4T1細(xì)胞培養(yǎng)用的是高糖DMEM

問(wèn)：4T1細(xì)胞形態(tài)特征

4T1細(xì)胞形態(tài)特征為上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

問(wèn)：小鼠4T1細(xì)胞傳代后不長(zhǎng)

這些因素都會(huì)影響細(xì)胞長(zhǎng)得慢

1.沒(méi)有保證密度，細(xì)胞長(zhǎng)不起來(lái)，可以先培養(yǎng)，然后消化重新鋪瓶，提高密度培養(yǎng)

2.操作時(shí)力度沒(méi)控制好，將細(xì)胞吹碎，狀態(tài)變差

3.血清質(zhì)量不好，影響細(xì)胞生長(zhǎng)

問(wèn)：4T1細(xì)胞能成瘤嗎

Yes，forms tumors and metastasizes in BALB/c mice.

問(wèn)：4T1細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)小黑點(diǎn)

如果在顯微鏡下觀(guān)察到了小黑點(diǎn)，基本上可以將范圍縮小到是細(xì)菌污染或者細(xì)胞碎片這兩種情況。

到底是污染還是碎片，可從以下幾個(gè)方面進(jìn)行判斷：

1) 運(yùn)動(dòng)性

很多會(huì)動(dòng)的小黑點(diǎn)，只是發(fā)生布朗運(yùn)動(dòng)的細(xì)胞碎片。在顯微鏡下觀(guān)察黑點(diǎn)大小和形狀是否規(guī)則，是否運(yùn)動(dòng)，是做布朗運(yùn)動(dòng)還是呈直線(xiàn)型快速移動(dòng)。如果黑點(diǎn)大小不規(guī)則，做布朗運(yùn)動(dòng)，黑點(diǎn)可能是細(xì)胞碎片（可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳或者消化過(guò)度引起的），也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的，也可能是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物。

處理方法：消化離心棄上清后，PBS重懸洗洗，750rpm低速離心4分鐘，重新鋪下，鋪回去鏡下觀(guān)察一下是不是干凈的

如果黑點(diǎn)大小一致，快速移動(dòng)，很可能是細(xì)菌污染。

2）培養(yǎng)基的渾濁度

細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)于細(xì)菌來(lái)說(shuō)是非常營(yíng)養(yǎng)的大餐。一旦發(fā)生污染，細(xì)菌就會(huì)大量繁殖。培養(yǎng)基PH值迅速下降，培養(yǎng)基變黃且會(huì)變渾濁。通常在12小時(shí)內(nèi)就可以發(fā)現(xiàn)，而在48小時(shí)內(nèi)就非常明顯。

問(wèn)：4T1細(xì)胞DMSO凍存比例

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配

        或無(wú)血清細(xì)胞凍存液（無(wú)需程序性降溫）