今天在講解普魯氏藍(lán)染色法之前，要先給大家介紹下它的染色對(duì)象——含鐵血黃素。

      在組織切片中，我們可以通過(guò)特殊染色清楚地顯示各種各樣的有色物質(zhì)，這些物質(zhì)被稱(chēng)為色素。色素的種類(lèi)較多，其性質(zhì)、來(lái)源和意義也各不相同，可以分為人為性色素及沉淀和病理性色素及沉淀物，因此“色素染色”的意義就在于鑒別和確認(rèn)它們，從而推斷病理意義，而我們今天主角含鐵血黃素就是一種組織病理學(xué)中常見(jiàn)的色素。

      含鐵血黃素是一種血紅蛋白源性色素，為金黃色或棕黃色顆粒，因其含鐵、金黃色，故稱(chēng)為含鐵血黃素。正常機(jī)體內(nèi)的有些鐵以鐵蛋白和含鐵血黃素的形式貯存在骨髓中的單核-吞噬細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，幼紅細(xì)胞的線粒體中也有含鐵血黃素。當(dāng)紅細(xì)胞生命結(jié)束或受到破壞時(shí)，通常是在淋巴網(wǎng)狀系統(tǒng)（如脾臟）由巨噬細(xì)胞吞噬降解，紅細(xì)胞中血紅蛋白被吞噬后，在吞噬細(xì)胞線粒體的鐵小體作用下分解為含鐵的“含鐵血黃素”和不含鐵的“橙色血質(zhì)”兩部分，鐵就從血紅蛋白中分離出來(lái)，大部分被骨髓循環(huán)再利用，并以含鐵血黃素的形式儲(chǔ)藏起來(lái)。

      而我們今天介紹的普魯士藍(lán)染色就是一種將含鐵血黃素呈現(xiàn)出來(lái)的染色。

普魯士藍(lán)染色原理

      普魯士藍(lán)染色（Perls stain）又稱(chēng)含鐵血黃素染色，及經(jīng)過(guò)亞鐵氰化鉀與稀酸反應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色；主要針對(duì)于三價(jià)鐵，是一種經(jīng)典的組織化學(xué)反應(yīng)，是顯示組織內(nèi)三價(jià)鐵的一種敏感、傳統(tǒng)優(yōu)良的方法；染色原理是亞鐵氰化鉀溶液使三價(jià)鐵離子從蛋白質(zhì)中被稀鹽酸分離出來(lái)，三價(jià)鐵與亞鐵氰化鉀反應(yīng)生成一種不溶解的藍(lán)色化合物，稱(chēng)之為普魯士藍(lán)染色。三價(jià)鐵的亞鐵氰化物是一種穩(wěn)定的化合物，反應(yīng)后亦可用其他染色劑進(jìn)行復(fù)染（核固紅，伊紅等）

普魯士藍(lán)應(yīng)用

      普魯士藍(lán)常用于顯示組織內(nèi)各種出血性病變，常見(jiàn)于吞噬細(xì)胞內(nèi)，可用來(lái)觀察組織細(xì)胞中有無(wú)鐵元素存在，以及鐵元素存在的位置及含量。

在臨床檢測(cè)上的應(yīng)用有：

① 顯示和證明組織內(nèi)局部出血的各種出血性病變；

② 顯示慢性心衰時(shí)的肺淤血和心衰細(xì)胞（鐵陽(yáng)性巨噬細(xì)胞)；

③ 證明和區(qū)分含鐵血黃素和其他色素沉著，注意正常骨髓和脾臟中常見(jiàn)被染色的三價(jià)鐵離子。

普魯士藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)步驟

1、石蠟切片脫蠟至水；

2、普魯士藍(lán)染色：染色液等比例混合，切片入染液中染色1h，蒸餾水洗2遍；

3、復(fù)染：核固紅染色3min，流水沖洗；

4、脫水封片：切片入無(wú)水乙醇 3 缸脫水，各 5min，二甲苯透明 5min，中性樹(shù)膠封片；

5、顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。

注意事項(xiàng)

1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。組織固定常采用10%中性福爾馬林，經(jīng)普通福爾馬林長(zhǎng)期固定后，組織會(huì)有損傷。避免使用酸性固定劑，鉻酸鹽處理也會(huì)妨礙鐵的保存。

2、整個(gè)操作過(guò)程中容器要干凈，避免用金屬鐵制品，洗切片和容器時(shí)以蒸餾水為宜，因普通水內(nèi)含鐵質(zhì)。Perls stain 染色時(shí)，應(yīng)根據(jù)樣本情況調(diào)整著色時(shí)間。

3、所有切片都應(yīng)使用同一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照切片，選擇適合的對(duì)照非常重要。

結(jié)果判讀

鐵離子呈藍(lán)色，細(xì)胞核紅色

送樣運(yùn)輸要求

樣本放置于10倍樣本體積的固定液中固定24h以上，常溫運(yùn)輸（勿冷凍結(jié)冰）；

2. 石蠟切片常溫運(yùn)輸，冰凍切片-20℃運(yùn)輸。

實(shí)驗(yàn)圖例