貼壁細(xì)胞傳代實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

提前開啟紫外照射30min消毒滅菌，工作臺(tái)開燈通風(fēng)10min，用75%酒精擦拭臺(tái)面

貼壁細(xì)胞傳代所需試劑物品

細(xì)胞培養(yǎng)液，胰酶，PBS，培養(yǎng)皿等

貼壁細(xì)胞傳代步驟

從培養(yǎng)箱拿出細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)良好，且密度達(dá)到80%以上時(shí)，即可進(jìn)行傳代

第 一步：將細(xì)胞培養(yǎng)皿放入超凈工作臺(tái)中，吸去上清，沿血壁加入5ml PBS

第二步：輕洗細(xì)胞表面，洗去表面培養(yǎng)基，再將PBS棄去

第三步：加入2ml胰酶，37℃消化1-2分鐘，顯微鏡下觀察細(xì)胞是否脫落

第四步：加入3ml完全培養(yǎng)基終止消化，將細(xì)胞吹散，移入15ml離心機(jī)管中，1000rpm，離心5min

第五步：取兩個(gè)新的培養(yǎng)皿，各加入8-10m1完全培養(yǎng)基，在培養(yǎng)皿上標(biāo)記細(xì)胞名稱，日期和所用培養(yǎng)基名稱

第六步：離心結(jié)束后，用75%的酒精噴管身后，放回工作臺(tái)中，吸去上清

第七步：取2ml完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，平均分配到2個(gè)皿中，“8字法”搖勻后，鏡檢是否鋪勻

第八步：把培養(yǎng)皿放入C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天觀察貼壁情況

注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)過程中需維持細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長期，80%左右即可傳代，傳代比例請(qǐng)參照說明書建議

2. 消化時(shí)間不宜過長，大部分細(xì)胞回縮變圓并有少量細(xì)胞脫落即可中止消化，難消化的細(xì)胞可分次消化，每次時(shí)間不超過5min

3. 培養(yǎng)過程中需要定期換液，一般細(xì)胞建議2-3天換液一次

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