實(shí)驗(yàn)原理

膠原纖維染色如苦味酸-酸性品紅法和三色染色法,都是利用兩種或三種陰離子染料混合一起或先后作用而完成鑒別染色的。Van Gieson氏染色中,為什么膠原纖維呈紅色(被酸性品紅所染),肌纖維呈黃色(被苦味酸所染)。而Masson氏染色時(shí)膠原纖維呈藍(lán)色(被苯胺藍(lán)所染),肌纖維呈紅色(被酸性品紅和麗春紅所染),這與陰離子染料分子的大小和組織的滲透性有關(guān)。 

可發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞被最小分子的陰離子染料著染，肌纖維與胞質(zhì)被中等大小的陰離子染料著染,而膠原纖維則被大分子的陰離子染料著染。由此說(shuō)明了紅細(xì)胞對(duì)陰離子染料的滲透性最小,肌纖維與胞質(zhì)次之,而膠原纖維具有最大的滲透性。根據(jù)組織不同的滲透性能,選擇分子大小不同的陰離子染料進(jìn)行染色,便可把不同組織成分顯示出來(lái)。

常用作膠原纖維染色的幾種陰離子染料的分子量由小到大分別是: 

苦味酸(黃色),分子量,229.11 

橙黃G(橙黃色),分子量452 

麗春紅(紅色),j女子量,480.42 

酸性品紅(紅色),分子量,585.53 

苯胺藍(lán)(藍(lán)色),分子量737.72 

亮綠(綠色),分子量792.72 

甲基藍(lán)(藍(lán)色),分子量,799 

因此,在Van Gieson氏法中,苦味酸染紅細(xì)胞和肌纖維,酸性品紅染膠原纖維,而在Masson氏法中,酸性品紅或麗春紅染肌纖維,而苯胺藍(lán)或亮綠染膠原纖維。染色反應(yīng)是一個(gè)很復(fù)雜的過(guò)程,膠原纖維染色除上述兩個(gè)方面外,不排除電子吸附和排斥作用。

膠原纖維和肌纖維的鑒別染色是病理組織制片的一個(gè)重要方法,它的染色對(duì)病理診斷很有幫助。1.來(lái)源于間胚葉的腫瘤,如纖維瘤、平滑肌瘤、橫紋肌瘤、神經(jīng)纖維瘤甚至它們的肉瘤等都產(chǎn)生一定的纖維,這些纖維在H-E染色中都染成紅色而難以區(qū)別。通過(guò)用上述方法染色,一般可區(qū)分出該腫瘤組織是膠原纖維源性,還是肌源性,或者是神經(jīng)纖維源性。對(duì)于后者,有時(shí)還需加染磷鎢酸蘇木素來(lái)協(xié)助診斷。2.在慢性炎癥,機(jī)化和瘢痕形成中,可隨病理過(guò)程的發(fā)展而出現(xiàn)膠原纖維。在早期,H-E染色切片中的這些纖維往往和纖維蛋白很難鑒別,通過(guò)膠原纖維染色則可證實(shí)。如慢性腎小球腎炎的腎小球纖維化后,MASSON染色呈藍(lán)色。大葉性肺炎或血栓發(fā)生機(jī)化后,原有的纖維蛋白灶內(nèi)出現(xiàn)膠原纖維,MASSON染色呈藍(lán)色。風(fēng)濕性肉芽腫已靜止時(shí),阿嘯夫氏(Aschoff's。巨細(xì)胞消失,病灶內(nèi)的纖維被膠原纖維取代,MASSON染色也呈藍(lán)色。胃、十二指腸潰瘍愈復(fù)時(shí),在漬瘍底部出現(xiàn)膠原纖維構(gòu)成的疤痕,慢性闌尾炎時(shí)闌尾壁出現(xiàn)的纖維化,肝硬化時(shí)膠原纖維的增生,這些用Masson。染色也都染成藍(lán)色。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示

膠原纖維呈藍(lán)色；

背景呈紅色至紫紅色（主要為肌纖維，胞質(zhì)，纖維素，角質(zhì)蛋白細(xì)胞核等）

紅細(xì)胞呈水紅色。

實(shí)驗(yàn)儀器

試劑

耗材：

微波修復(fù)盒，玻璃缸，染色架，玻璃燒杯，染色杯，蓋玻片

實(shí)驗(yàn)步驟

脫蠟

1 將烤箱中染色架上烤好的石蠟切片樣本放入二甲苯Ⅰ浸泡20min，

2 將樣本移入二甲苯Ⅱ浸泡20min，

3 待樣本上的蠟溶解后，將樣本轉(zhuǎn)入無(wú)水乙醇Ⅰ浸泡5min，

4 將樣本轉(zhuǎn)入無(wú)水乙醇Ⅱ浸泡5min，

5 用無(wú)水乙醇刷洗20s移入水盆中用自來(lái)水流水將樣本上的酒精沖洗干凈。  

染色

1 切片入微波修復(fù)盒中的Masson染液1過(guò)夜孵育，

2取出切片，拿染色杯用自來(lái)水快速水洗至無(wú)色；

2 切片入微波修復(fù)盒中的Masson染液2（染色前65℃預(yù)熱30min）中放回烤箱染色3-5min后，拿染色杯用自來(lái)水，水洗2-3次；

3 切片入微波修復(fù)盒中的Masson染液3染色30s-1min

4 取出切片，稍微瀝干，入微波修復(fù)盒中的Masson染液4（染色前置于65℃預(yù)熱30min，用完放回烤箱預(yù)熱）染色5-20s。

5 切片入1%冰醋酸（需自備）內(nèi)分化數(shù)秒，三缸，每缸分化5-10s

脫水封片

脫水：

切片入微波修復(fù)盒中的無(wú)水乙醇三缸，每缸5-10s。

切片轉(zhuǎn)入微波修復(fù)盒中的正丁醇 10-20s。

封片：

切片入染色缸中的二甲苯（專用）Ⅰ5min

轉(zhuǎn)入染色缸中的二甲苯（專用）Ⅱ5min

放入風(fēng)口快速吹干后，用中性樹(shù)膠封片。

染液名稱表