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實(shí)驗(yàn)技巧
實(shí)驗(yàn)技巧

實(shí)驗(yàn)技巧

透射電鏡之自噬

自噬的概念


自噬(autophagy=self-eating)意為自體吞噬,是真核細(xì)胞在自噬相關(guān)基因(autophagy related gene,Atg)的調(diào)控下通過(guò)溶酶體機(jī)制,負(fù)責(zé)將受損的細(xì)胞器、錯(cuò)誤折疊的蛋白及其他大分子物質(zhì)等運(yùn)送至溶酶體降解并再利用的進(jìn)化保守過(guò)程。自噬可防止細(xì)胞損傷,促進(jìn)細(xì)胞在營(yíng)養(yǎng)缺乏的情況下存活,并對(duì)細(xì)胞毒性刺激作出反應(yīng)。雖然自噬在饑餓和/或應(yīng)激條件下發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用,但其還可調(diào)節(jié)代謝條件,在不同程度上導(dǎo)致各種人類疾病。


自噬的影響因素


其影響因素包括:如饑餓、生長(zhǎng)因子缺乏、微生物感染、細(xì)胞器損傷、蛋白質(zhì)折疊錯(cuò)誤或聚集、DNA損傷、放療、化療等等,均會(huì)造成細(xì)胞自噬產(chǎn)生。正常情況下,細(xì)胞自噬發(fā)生的概率很低,只有受到以上因素的影響時(shí),自噬才會(huì)被激活,參與機(jī)體穩(wěn)態(tài)調(diào)控。


如何觀察自噬


由于自噬體屬于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu),普通光鏡下看不到,因此,直接觀察自噬需在透射電鏡下。自噬的過(guò)程大致分為三個(gè)階段:


第 一階段(起始):自噬誘導(dǎo)信號(hào)被細(xì)胞接受后,類“脂質(zhì)體” 碗狀結(jié)構(gòu)即在胞漿某處形成小的膜結(jié)構(gòu),在 電鏡下觀察到其不斷擴(kuò)張、呈非球形、扁平狀雙層膜的碗狀結(jié)構(gòu),稱為自噬前體(phagophore),主要特征是成新月?tīng)睿瑔螌踊蚨鄬幽?/p>


第二階段(延伸):不斷延伸的自噬前體,將胞漿中的若干成分(包括細(xì)胞器)收口包入,成為密閉的球狀自噬體(autophagosome),內(nèi)含胞漿成分,如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。


第三階段(降解):自噬體與溶酶體(lysosome)發(fā)生融合,形成自噬溶酶體(autolysosome),期間溶酶體酶降解自噬體的內(nèi)膜, 使兩者的內(nèi)容物合為一體,自噬體中的包含物被降解,將產(chǎn)物諸如氨基酸、脂肪酸之類輸送到胞漿中,重新利用供能,殘?jiān)鼊t被排出細(xì)胞外或滯留于胞漿。


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實(shí)驗(yàn)圖例

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