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實驗介紹 :
哺乳動物線粒體 DNA (Mitochondrial DNA,mtDNA)是一全長為 16.5kb左右的雙鏈閉環(huán)分子。與核不同的是,線粒體基因組為多拷貝基因組。mtDNA 功能的完成既依賴于每一個mtDNA分子結(jié)構(gòu)的完整性,也同時依賴于細胞中 mtDNA 的拷貝數(shù)。許多研究表明,癌癥、神經(jīng)退行性疾病、心血管疾病、糖尿病等疾病的發(fā)生發(fā)展與mtDNA大片段、全基因組的缺失及拷貝數(shù)變化密切相關(guān)。
實驗流程:
以經(jīng)過處理的細胞為模板,擴增出mtDNA的目的基因,純化回收,制備標準品。使用mtDNA目的基因引物和核基因?qū)φ找飳z測樣本進行擴增,結(jié)合標準品進行mtDNA拷貝數(shù)的定量檢測和分析,并繪制標準曲線。
結(jié)果展示:
送樣運輸要求:
1)動物組織:100 mg(黃豆大小),最少50 mg(綠豆大小),脂肪組織,結(jié)締組織,纖維化組織適當增加,干冰運輸。
2)細胞:1×10個細胞。細胞沉淀或加入trizol的細胞樣本(不要直接運輸加trizol的細胞培養(yǎng)皿),干冰運輸。
3)全血:最少1mL新鮮血液EDTA抗凝管,-20°℃運輸。
4)植物:新鮮的葉、果肉、種子等最少需100mg,干冰運輸。
5基因組DNA,干冰運輸。
RNA/DNA提取
實驗介紹 :
Trizol法即異硫氰酸胍-苯酚法,是最為常見也是最經(jīng)典的提取方法。
強變性劑異硫氰酸胍首先使細胞裂解,并使核蛋白復合體中的蛋白變性。
在特定pH條件下,由于DNA和RNA的溶解度不同而被分離,DNA位于中間相,RNA位于水相,再有機溶劑來沉淀RNA即可得到純度較高的RNA。
結(jié)果展示:
( RNA檢測)
(DNA標準品:1mg/ml)
實驗中通常用OD260/280來檢測RNA純度,同時將OD260/230作為參考值,不同比值所代表的意義
送樣運輸要求:
1)動物組織:100 mg(黃豆大小),最少50 mg(綠豆大小),脂肪組織,結(jié)締組織,纖維化組織適當增加,干冰運輸。
2)細胞:1×10個細胞。細胞沉淀或加入trizol的細胞樣本(不要直接運輸加trizol的細胞培養(yǎng)皿),干冰運輸。
3)全血:最少1mL新鮮血液EDTA抗凝管,-20°℃運輸。
4)植物:新鮮的葉、果肉、種子等最少需100mg,干冰運輸。
5)cDNA和基因組DNA,干冰運輸。