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分子與生化實驗服務
分子與生化實驗服務

Molecular Experimental Services

分子與生化實驗服務

Absolute quantification of real-time PCR

實驗介紹 :
絕 對定量是通過樣品的Cq值和標準曲線進行比較實現(xiàn)的。首先為了建立標準曲線,需要已知拷貝數(shù)濃度的標準品,對標準品進行5次以上的連續(xù)梯度稀釋,將稀釋的標準品進行實時熒光定量PCR擴增,根據(jù)各樣品的拷貝數(shù)濃度及相應的Cq值繪制標準曲線,得到線性方程Cq= -klgX0+b,其中X0為起始模板量。然后將未知樣本的Cq值與此標準曲線進行比較,確定其拷貝數(shù)濃度。


實驗流程: 

取材-DNA提取- 稀釋標準品-QPCR擴增-數(shù)據(jù)分析-發(fā)報告


結果展示

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送樣運輸要求:
1)動物組織:100 mg(黃豆大小),最少50 mg(綠豆大小),脂肪組織,結締組織,纖維化組織適當增加,干冰運輸。
2)細胞:1×10個細胞。細胞沉淀或加入trizol的細胞樣本(不要直接運輸加trizol的細胞培養(yǎng)皿),干冰運輸。
3)全血:最少1mL新鮮血液EDTA抗凝管,-20°℃運輸。
4)植物:新鮮的葉、果肉、種子等最少需100mg,干冰運輸。
5)質(zhì)粒和基因組DNA,干冰運輸。