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實(shí)驗(yàn)介紹:
原位雜交技術(shù)(in situhybridization)是以標(biāo)記的核酸分子為探針,在組織細(xì)胞原位檢測(cè)特異核酸分子的技術(shù)。 使含有特異序列、經(jīng)過(guò)標(biāo)記的核酸單鏈即探針,在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互補(bǔ)核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交,再以放射自顯影或免疫細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)標(biāo)記探針進(jìn)行探測(cè),從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分子
實(shí)驗(yàn)流程:
DAB: 組織切片脫蠟至水—畫(huà)圈消化—預(yù)雜交—雜交過(guò)夜— 滴加鼠抗地高辛標(biāo)記過(guò)氧化物酶(anti-DIG-HRP)—DAB顯色— 蘇木素染核—脫水透明—封片鏡檢
熒光:組織切片脫蠟至水—畫(huà)圈消化—預(yù)雜交—雜交過(guò)夜— 滴加鼠抗地高辛標(biāo)記過(guò)氧化物酶(anti-DIG-HRP)—TSA熒光素— Dapi染核—封片鏡檢
注意事項(xiàng):
(1)石蠟切片:組織取樣后應(yīng)立即置于固定液中,常溫運(yùn)輸切勿冷凍結(jié)冰;
(2)冰凍切片:-20度運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示:
Fish CD68+探針 CK19+探針